陈敏 夏寿明
摘 要：采用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀法和热板法，以生理盐水为空白对照组，地塞米松钠为阳性对照组，黄芩水煎醇沉液高、中、低剂量（10.0g/kg、5.0g/kg、2.5g/kg）为试验组，腹腔注射后，测定小鼠的耳廓肿胀率以观察黄芩水煎醇沉液的抗炎作用;以安乃近为阳性对照组，黄芩水煎醇沉液腹腔注射和黄芩水煎液灌胃2个处理，测定小鼠的痛阈值以观察黄芩水煎醇沉液的镇痛作用。结果表明，黄芩水煎醇沉液可降低小鼠的耳廓肿胀率（P<0.05或P<0.01），高剂量组优于阳性对照组（P<0.05）;可提高小鼠的痛阈值（P<0.05或P<0.01），但黄芩水煎液灌胃处理仅高剂量组小鼠的痛阈值提高（P<0.01）。说明黄芩水煎醇沉液具有一定的抗炎镇痛作用，呈现量效关系，且腹腔注射抗炎镇痛效果强于灌胃。
关键词：黄芩;水煎醇沉液;抗炎作用;镇痛作用;小鼠
中图分类号 R285.5文献标识码 A文章编号 1007-7731（2020）15-0034-03
黄芩，别名子芩、土金茶根、山茶根等，系唇形科黄芩属多年生草本植物黄芩的干燥根，主治湿温、暑温胸闷呕恶、湿热痞满、黄疸、肺热咳嗽、高热烦渴、胎动不安等，常用来作为利尿剂、缓泻药、解热剂等[1]。现代医学研究表明，黄芩的主要有效成分为黄酮类化合物，以黄芩苷的含量最高，其具有抑菌、抗炎、抗变态反应、降血压、抗癌、治疗慢性肝炎等作用[2]。近年来，农业农村部提出动物抗生素减量及替代计划，并组织科研力量对中草药、益生素等抗生素替代物进行攻关研究，未来中草药必将在畜禽生产替代抗生素等方面得到广泛的应用。为此，本试验开展了黄芩水煎醇沉液对小鼠的抗炎、镇痛作用的初步研究，为其在兽医临床应用提供用药选择。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物 昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄兼用，由安徽科技学院实验动物中心提供。
1.1.2 药材及试剂 黄芩，由安徽科技学院中药园提供;无水乙醇、二甲苯、生理盐水、地塞米松钠注射液、安乃近注射液等。
1.1.3 主要仪器 RB-200智能热板仪，成都泰盟科技有限公司;TDL-80-ZB型离心机，上海安亭科学仪器厂;YP-6000型电子天平，上海精科电子厂;SENCO?R系列旋转蒸发器，上海申生科技有限公司;SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司;直径为8mm的不锈钢冲子等。
1.2 试验方法
1.2.1 黄芩水煎醇沉液的制备 称取黄芩400g放入不锈钢锅中，用水浸泡30min，煎煮3次，时间分别为60min、30min、20min，合并3次滤液，调pH至7.5，加热浓缩至400mL，离心10min（3800r/min），取上清液加蒸馏水定容至400mL，即得含生药1g/mL黄芩水煎液。取黄芩水煎液200mL，加入无水乙醇300mL，使乙醇含量为60%，4℃下静置12h，离心10min（3800r/min），用旋轉蒸发器回收乙醇，加蒸馏水定容至200mL，再加入800mL的无水乙醇，使乙醇的含量为80%，4℃下静置12h，离心10min（3800r/min），回收乙醇，加蒸馏水定容至200mL，即得含生药1g/mL的黄芩水煎醇沉液，装瓶消毒，4℃保存备用。
1.2.2 抗炎试验 采用二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀法，取小鼠50只，称其体重，随机分为5组，每组10只。试验组（高、中、低剂量）腹腔注射黄芩水煎醇沉液10.0g/kg、5.0g/kg、2.5g/kg，阳性对照组腹腔注射地塞米松钠0.01g/kg，空白对照组腹腔注射等量生理盐水。每日1次，连续给药6d。末次给药30min后，用二甲苯50μL均匀涂布在小鼠右耳背腹两侧，60min后将小鼠处死，剪下左右两耳，用直径为8mm的不锈钢冲子，在两耳同一部位打下圆形耳片组织块称重，计算小鼠耳廓的肿胀率、肿胀抑制率[3]。计算公式为：肿胀率（%）=（致炎后的右耳片质量-对照的左耳片质量）/对照的左耳片质量×100;肿胀抑制率（%）=（对照组平均肿胀率-用药组的平均肿胀率）/对照组平均肿胀率×100。
1.2.3 镇痛试验 采用热板法测定小鼠的镇痛反应[4]，当小鼠受热刺激（55.0±0.5）℃后，而产生的疼痛反应（即舔后足），以出现舔后足的时间计为该鼠的痛阈值（s）;凡痛阈值小于5s或大于60s或在热板仪上经常跳跃者均弃之不用。试验分黄芩水煎醇沉液腹腔注射和黄芩水煎液灌胃给药2个处理，每个处理均筛选出合格小鼠40只，称其体重，随机分为4组，每组10只。黄芩水煎醇沉液腹腔注射、黄芩水煎液灌胃给药处理的剂量和方法同“1.2.2”，阳性对照组腹腔注射和灌胃安乃近0.1g/kg。给药前分别测出每只小鼠的正常痛阈值，取2次平均值作为该小鼠给药前痛阈值，给药30min后测定其痛阈值的变化。痛阈增值（s）=给药后痛阈值（s）-给药前痛阈值（s），痛阈提高率=痛阈增值（s）/给药前痛阈值（s）×100。
1.3 数据统计分析 试验所得各组数据以[x]±SD表示，组间采用t检验进行差异显著性分析。
2 结果与分析
2.1 腹腔注射黄芩水煎醇沉液对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响 从表1可以看出，与空白对照组比较，高、中、低剂量组的小鼠耳廓肿胀率明显下降，其中低剂量组小鼠耳廓肿胀率与给药前比较差异显著（P<0.05），高、中剂量组的小鼠耳廓肿胀率与给药前比较差异极显著（P<0.01）;与阳性对照组比较，低、中剂量组小鼠耳廓肿胀率有所下降，但差异不显著;大剂量组小鼠耳廓肿胀率下降明显，差异显著（P<0.05）。肿胀抑制率随剂量增加而提高。
2.2 腹腔注射黄芩水煎醇沉液对小鼠镇痛作用的影响 从表2可以看出，与给药前比较，给药后试验组的小鼠痛阈值明显提高，其中低剂量差异显著（P<0.05）;高、中剂量组差异极显著（P<0.01）。与阳性对照组比较，仅高剂量组的痛阈增值明显提高，差异显著（P<0.05）。痛阈提高率随剂量增加而提高。
2.3 灌胃黄芩水煎液对小鼠镇痛作用的影响 从表3可以看出，与给药前比较，给药后试验组的小鼠痛阈值有所提高，仅高剂量组痛阈值差异极显著（P<0.01）;与阳性对照组比较，小鼠的痛阈增值有所提高，但差异不显著。痛阈提高率随剂量增加而提高。
3 结论与讨论
炎症是机体损伤所产生的防御反应，主要由血管与细胞的应答构成，其本质是清除与消灭引起损伤的各种致炎因子和促进损伤的修复。二甲苯具有较强的化学刺激性，可使组织中肥大细胞等释放组织胺、5-羟色胺等血管活性胺类，引起局部组织中微血管扩张和通透性升高;在炎症过程中，血管内皮细胞自身的损伤可使组织液外渗，引起水肿[5]。黄芩的抗炎作用与炎症因子前列腺素（PG）E2的产生和释放受抑制有关，其抗炎机制为黄芩素通过抑制前列腺素E2、12-羟基二十四碳四烯酸、白三烯的生物合成而影响花生四烯酸代谢达到抗炎目的[6]。本试验结果表明，黄芩水煎醇沉液对炎症过程中的肿胀具有明显的抑制作用，给药组小鼠耳廓肿胀程度明显低于生理盐水组和地塞米松组，其抗炎效果与剂量呈正相关。
痛觉是动物机体对伤害性和疾病的一种信号，从而引起一系列的防御性和保护性反应。各种伤害性刺激首先引起组织释放一些致痛物质，如K+、H+、组织胺、5-羟色胺、缓激肽、前列腺素等，作用于游离的神经末梢，产生痛觉冲动，上传至中枢引起痛觉。本試验结果表明，黄芩对小鼠有一定的镇痛作用，腹腔注射的作用强于灌胃，且黄芩水煎醇沉液对小鼠的镇痛作用存在剂量依赖关系，随着剂量的增大，镇痛作用逐渐增强。
参考文献
[1]Matsuda T，Hatano K，Harioka T，et al.Histochemical investigation of β-glucuronidase in culture cells and regenerated Plants of Scutellaria baicalensis Georgi[J].Plants Cell RePorts，2000，19：390-394.
[2]张兆旺.中药药剂学[M].北京：中国中医出版社，2003：123-124.
[3]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：中国中医出版社，2003：123-124.
[4]冯保明，戚南山，宁康健.银杏叶对小鼠抗炎镇痛作用的研究[J].中兽医医药杂志，2008，3：9-11.
[5]宋继谒.病理学（第二版）.北京：科学出版社，2000：54.
[6]王玮，吴莹瑶，卢岩，等.野黄芩苷抗炎作用的实验研究[J].中国医科大学学报，2003，32（6）：503-504.
（责编：张宏民）