摘要：目的：研究大蓟对癌细胞生长的抑制作用。方法：细胞形态观察、活细胞计数法和克隆形成率法研究大蓟对人白血病细胞K562、肝癌细胞HepG2、宫颈癌细胞Hela、胃癌细胞BGC823、结肠癌细胞HT-29生长的抑制作用。结果：大蓟可使五种癌细胞形态上发生皱缩、变圆、脱壁、裂碎等变化，生长受到明显抑制，抑制率最高可达81.73%。结论：大蓟有确切的抑癌作用。
关键词：大蓟；癌细胞；生长；抑制作用
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0761-02
笔者在临床上见一癌症病人，经中医中药治疗，取得十分满意的效果，在征得主治医生同意后，将其方中出现频率较高的中药制成提取液，逐一扩大抑癌筛选范围，发现其中的大蓟提取液具有良好作用，现将大蓟的研究情况报道如下。
1材料
1.1药材大蓟生药购于内蒙古中蒙医院药房。取生药适量，六蒸水洗3遍，烘干，称量；用适量3.5%乙酸浸湿，充分烘干；六蒸水浸泡过夜，武火煮沸，文火煎煮20min，纱布过滤，滤渣加适量六蒸水置115℃高压蒸汽锅内30min，纱布过滤；合并两次滤液，2℃冰箱中静置72h，高、中、低速滤纸，0.45μm、0.22μm微孔滤膜逐级过滤；滤液蒸发浓缩、灭菌、4℃保存，使用时以培养液稀释至所需质量分数（以生药计算）。
1.2器材与试剂倒置相差显微镜（Nikon eclipseTE2000-U），超净台（苏州净化设备有限公司），CO2培养箱（GALAXY & BINDER），24孔培养板（BIOFIL），RPMI1640、高糖DMEM（GIBCO），胎牛血清（TBD）。
1.3癌细胞系人白血病细胞系K562、肝癌细胞系HepG2、胃癌细胞系BGC823、宫颈癌细胞系Hela、结肠癌细胞HT-29（均由本实验室传代保种），均常规传代培养。
2方法
2.1实验分组每种细胞均设对照组（不加药）与观察组（加药），观察组分设高（12mg/mL）、中（6mg/mL）、低（2mg/mL）3个剂量组。
2.2倒置相差显微镜下观察细胞形态变化取对数生长期的5种癌细胞，均以2×104/孔接种于24孔培养板，接种24h后加药。加药后8h、24h、48h于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化并拍照。
2.3台盼蓝拒染法计活细胞数接种、加药同2.2。加药后每隔24h各组均取5孔细胞台盼蓝拒染法计活细胞数，每孔计3次，5孔取平均值，计算出当天的生长抑制率（抑制率=［（对照组平均活细胞数-观察组平均活细胞数）/对照组平均活细胞数］×100%）[1]，连续6天。
2.4克隆形成率的检测（不包括k562）取对数生长期的HepG2、Hela、BGC823、HT-29细胞，以500个/孔接种于6孔培养板，接种48h后加药，每个浓度设3复孔，静置120h后，弃培养液，PBS洗2次，甲醇/冰醋酸3:1固定20min，吉姆萨染色20min，显微镜下计数大于50个细胞的克隆数。计算出各组的克隆形成率，克隆形成率=（3孔平均克隆数/500）×100%[2]。
2.5抑制效果的判断与分析①细胞形态的观察与分析；②平均抑制率：6天的生长抑制率相加取平均值；③克隆形成率：观察组与对照组间比较采用χ２检验。
3结果
3.1大蓟对5种癌细胞形态的影响对照组：K562（图1）大小均匀，胞体圆整，折光性好，日益密集；HepG2（图3）、Hela（图5）、BGC823（图7）和HT-29（图9）紧贴板壁，胞间紧密接触，胞质透亮，可见分裂相，细胞集落不断扩大。观察组：加药后8h，K562多数大小不均，胞膜内陷或出泡；HepG2、Hela、BGC823和HT-29部分胞体回缩，胞质发暗、有颗粒物积累。加药后24h，K562（图2）大部分形态异常，或皱缩或内容物释放形成“鬼影”，折光性差，板底明显可见碎渣样物质；HepG2（图4）和Hela（图6）很多皱缩、变圆、脱壁，难觅分裂相，HepG2（图4）板底已明显可见碎渣样物质； BGC823（图8）和HT-29（图10）多数胞体回缩、丧失胞间联系，少数变圆，部分细胞内明显可见空泡，。加药后48h，k562多数崩解；HepG2、Hela大多数脱壁、碎裂，碎渣量大；BGC823、HT-29部分脱壁并出现碎渣。
3.2大蓟对5种癌细胞的平均抑制率表1。由表可见，大蓟对5种癌细胞的生长都有明显抑制作用，高浓度组的平均抑制率均大于50%；但对它们的抑癌强度不同：K562>HepG2>Hela>BGC823 >HT-29。
4讨论
近年来，越来越多的癌症病人愿意主动接受中医药治疗，中医药越来越显示出它的强大生命力。研究有效的抗癌中药特别是无毒中药更有其特殊的临床价值，对于中医药走出国门、挺进世界，为更多的癌症病人减除痛苦是必不可少的重要一环。大蓟是一种常用、无毒中药，临床应用广泛，本实验从形态观察、活细胞计数、克隆形成率检测三方面证实其对来源于血液、消化、生殖3个系统的5种癌细胞均有明显抑制作用，显示出良好的体外抑癌效果，提示值得进一步深入研究为其临床抗癌应用提供参考。
参考文献
［1］张卓然.细胞培养学与细胞培养技术[M].上海：上海科学技术出版社，2004：424.
［2］章静波.细胞生物学实用方法与技术[M].北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995：77.